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Reparo de DNAGuia Fundamental

Genes de resposta a danos no DNA

Cada célula humana sustenta aproximadamente 70.000 eventos de danos ao DNA por dia, variando desde oxidações de bases e erros de replicação até quebras de fita dupla (DSBs) induzidas por radiação ionizante ou colapso da forquilha de replicação. A resposta ao dano ao DNA (DDR) é uma rede de sinalização coordenada que detecta essas lesões, interrompe o ciclo celular para permitir o reparo e – se o dano for irreparável – inicia a apoptose ou senescência permanente. A arquitetura do DDR é hierárquica: sensores quinases (ATM, ATR) fosforilam centenas de substratos, transdutores quinases (CHK1, CHK2) amplificam e distribuem o sinal e proteínas efetoras executam a resposta celular.

Resposta Rápida

Quando ocorre um DSB, o complexo MRN (MRE11–RAD50–NBS1) detecta as extremidades quebradas do DNA em segundos e recruta a ATM quinase. O ATM ativado fosforila a histona H2AX (γH2AX) através dos domínios de megabase que flanqueiam a quebra, criando uma estrutura para maior recrutamento de proteínas DDR. Simultaneamente, ATM fosforila CHK2 (Thr68), p53 (Ser15) e BRCA1 (Ser1387/1423), coordenando parada G1/S (via p53 → p21), parada de fase intra-S (via degradação de CDC25A) e parada G2/M (via inibição de CHK2 → CDC25C), enquanto promove o reparo de recombinação homóloga através de BRCA1.

Visão Geral do Mecanismo

Quando ocorre um DSB, o complexo MRN (MRE11–RAD50–NBS1) detecta as extremidades quebradas do DNA em segundos e recruta a ATM quinase. O ATM ativado fosforila a histona H2AX (γH2AX) através dos domínios de megabase que flanqueiam a quebra, criando uma estrutura para maior recrutamento de proteínas DDR. Simultaneamente, ATM fosforila CHK2 (Thr68), p53 (Ser15) e BRCA1 (Ser1387/1423), coordenando parada G1/S (via p53 → p21), parada de fase intra-S (via degradação de CDC25A) e parada G2/M (via inibição de CHK2 → CDC25C), enquanto promove o reparo de recombinação homóloga através de BRCA1.

Caminho de resposta a danos no DNA

Quebra de fita dupla de DNAComplexo MRNMRE11 · RAD50 · NBS1ATM quinaseCHK2CDC25A/CdegradaçãoParada do ciclo celularTP53p21/PUMAApoptose/G1BRCA1PALB2 · RAD51Reparo de RHMDM2
quinase/sinalizaçãooncogenesupressor de tumorsaída celularinibe

Caminho passo a passo

1
Detecção de quebra por complexo MRN

O complexo MRN (nuclease MRE11, ATPase estrutural RAD50, adaptador NBS1) reconhece extremidades de quebra de fita dupla de DNA segundos após a formação. O NBS1 contata e recruta diretamente a ATM quinase para o local danificado através do seu motivo de ligação ATM C-terminal.

2
Ativação ATM e propagação de γH2AX

ATM estimulado por MRN sofre autofosforilação em Ser1981, liberando monômeros ativos que se espalham ao longo da cromatina. ATM fosforila a histona H2AX em Ser139 (criando γH2AX) em domínios de megabase, amplificando o sinal de dano e recrutando MDC1, RNF8 e RNF168.

3
Ativação de CHK2 e aplicação de ponto de verificação

ATM fosforila CHK2 em Thr68, permitindo a dimerização e trans-autofosforilação de CHK2. O CHK2 ativo fosforila o p53 (Ser20), reforçando a estabilidade do p53. O CHK2 também fosforila o CDC25A, direcionando-o para degradação e impondo a parada da fase intra-S.

4
Estabilização p53 e Parada G1

As fosforilações ATM (Ser15) e CHK2 (Ser20) de p53 interrompem sua interação com MDM2. O p53 estabilizado transcreve o CDKN1A (p21), que inibe o CDK2/ciclina E, interrompendo a progressão da fase G1 para a fase S e fornecendo uma janela para o reparo do DNA.

5
Recombinação Homóloga Mediada por BRCA1

BRCA1 ATM-fosforilado é recrutado para DSBs através da via da ubiquitina RNF8/RNF168/RAP80. O BRCA1 promove a ressecção final do DNA (gerando saliências de 3 'ssDNA) e pontes para PALB2 – BRCA2 – RAD51, catalisando a invasão da cadeia dirigida por modelo para reparo de alta fidelidade.

6
Conclusão do Reparo ou Apoptose

Se o reparo for bem-sucedido, as fosfatases PP2A desfosforilam γH2AX e CHK2, liberando pontos de verificação do ciclo celular e permitindo a retomada da divisão. Danos sustentados ou irreparáveis ​​mantêm a ativação do p53 além do limiar apoptótico, desencadeando a apoptose mitocondrial mediada por BAX/PUMA.

Relevância da Doença

Mutações germinativas em ATM (ataxia-telangiectasia), BRCA1/BRCA2 (câncer hereditário de mama/ovário), CHEK2 (risco moderado de câncer de mama) e TP53 (síndrome de Li-Fraumeni) causam síndromes de câncer hereditário distintas definidas pela etapa específica na via DDR que falha. Mutações somáticas do gene DDR em cancros esporádicos acumulam-se após a perda inicial do supressor tumoral – particularmente a mutação TP53 (>50% de todos os cancros), que elimina a rede de segurança apoptótica e permite que células com danos irreparáveis ​​no ADN sobrevivam e proliferem.

Implicações terapêuticas

Defeitos no reparo do DNA podem criar vulnerabilidades ao tratamento, mas o biomarcador não pode ser reduzido a um nome de gene. A evidência do inibidor de PARP depende do tipo de tumor, linha germinativa ou estado somático, contexto de recombinação homóloga, linha de terapia e regime. A perda de ATM está sendo estudada com ATR e outros inibidores de checkpoint, mas não é intercambiável com a perda de BRCA1/2. O status de MSI alto ou deficiente em reparo de incompatibilidade tem evidências de imunoterapia específicas para indicação. A sensibilidade e resistência da platina também variam de acordo com a doença e co-alterações.

Perguntas Comuns

Qual é a diferença entre ATM e ATR na resposta a danos no DNA?

ATM responde principalmente a quebras de fita dupla de DNA (DSBs) e é ativado pelo complexo MRN. O ATR responde ao DNA de fita simples (ssDNA) decorrente da paralisação da forquilha de replicação, dos intermediários de reparo por excisão de bases ou do reparo por excisão de nucleotídeos. Sinais ATM através de CHK2; Sinais ATR através de CHK1. Ambos convergem para efetores comuns, incluindo fosfatases p53 e CDC25.

O que é letalidade sintética no contexto do reparo de DNA?

A letalidade sintética ocorre quando a perda simultânea de dois genes é letal, enquanto a perda de um deles isoladamente é passível de sobrevivência. Células cancerígenas deficientes em BRCA1/2 não podem realizar recombinação homóloga; quando o PARP (necessário para o reparo do SSB) também é inibido, os SSBs não reparados colapsam os garfos de replicação em DSBs que não podem ser reparados, matando seletivamente as células tumorais e poupando as células normais com proficiência em HR.

O que é BRCAness?

BRCAness refere-se a um fenótipo genômico em tumores sem mutações BRCA1/2 que, no entanto, exibem deficiência de HR, caracterizada por alta perda genômica de heterozigosidade, desequilíbrio alélico telomérico e transições de estado em grande escala. BRCAness de outras mutações do gene DDR (ATM, PALB2, RAD51C) também prediz a sensibilidade do inibidor de PARP.

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Referências

  1. 1Ciccia A, Elledge SJ (2010). A resposta a danos no DNA: Tornando seguro brincar com facas. Célula Mol. PubMed 21111241
  2. 2Jackson SP, Bartek J (2009). A resposta ao dano ao DNA na biologia humana e nas doenças. Natureza. PubMed 19855398
  3. 3Senhor CJ, Ashworth A (2017). Inibidores de PARP: Letalidade sintética na clínica. Ciência. PubMed 28302823
  4. 4Harper JW, Elledge SJ (2007). A resposta ao dano ao DNA: dez anos depois. Célula Mol. PubMed 17344418